Preparation of Transgenic Mice

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R e l a t e d l i n k a b o u t t r a n s g e n i c m i c e i n C r e a t i v e A n i m o d e l : h t t p : / / w w w . c r e a t i v e - a n i m o d e l . c o m / A n i m a l - M o d e l - D e v e l o p m e n t / T r a n s g e n i c - A n i m a l s . h t m l P r e p a r a t i o n o f T r a n s g e n i c M i c e T a g s : t r a n s g e n i c m i c e i n j e c t i o n r e c e p t o r d o n o r 1 . T o g e t a 7 8 w e e k s o l d f e m a l e m o u s e a s t h e d o n o r c l o s i n g t h e v a g i n a l m o u t h . A t 3 : 0 0 p m g i v i n g P M S G 1 0 I U i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n t o e a c h m o u s e . 2 . 4 7 4 8 h o u r s l a t e r e a c h m o u s e i s g i v e n i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n o f h C G 0 . 8 I U a n d c o m b i n e d w i t h n o r m a l m a l e r a t s i n o n e c a g e . G e t t i n g a n u m b e r o f f e m a l e m i c e 2 m o n t h s o r a b o v e a s r e c e p t o r s l e t t i n g t h e m s t a y w i t h t h e l i g a t i o n m a l e r a t s i n o n e c a g e . 3 . T h e s e c o n d d a y b e f o r e 9 : 0 0 o b s e r v i n g t h e d o n o r s r e c e p t o r s k e e p i n g s p e r m s u p p o s i t o r y f o r s p a r e . P i c k i n g r e c e p t o r c a g e s o u t w i t h i s o l a t i o n m e a s u r e s . 4 . A r o u n d 1 0 : 3 0 t h e d o n o r s h o u l d b e k i l l e d b y b r e a k i n g t h e n e c k a n d t h e w h o l e o v i d u c t i s r e m o v e d t o h y a l u r o n i c a c i d 0 . 3 m g / M 2 l i q u i d . U n d e r t h e m i c r o s c o p e t e a r i n g t h e a m p u l l a o f f a l l o p i a n t u b e w i t h t w e e z e r s . F e r t i l i z e d e g g s o u t f l o w t o g e t h e r w i t h t h e p a r t i c l e s c e l l s . 5 . C a r e f u l l y o b s e r v i n g t h e f e r t i l i z e d e g g s i n t h e h y a l u r o n i d a s e M 2 l i q u i d . W h e n t h e g r a n u l o s a c e l l s s u r r o u n d e d f e r t i l i z e d e g g s a r e f a l l i n g o f f w e s h o u l d s u c k t h e m o u t a n d w a s h t h e m i n M 2 l i q u i d a n d f i n a l l y p l a c e d t h e m i n M 1 6 m e d i u m w i t h 5 C O 2 t o c u l t u r e u n d e r t h e e n v i r o n m e n t o f 3 7 C 0 . 6 . U n d e r t h e m i c r o s c o p e s e l e c t i n g t h e f e r t i l i z e d e g g s w i t h f u l l c e l l s t r a n s p a r e n t s t r a p a n d v i s i b l e m a l e p r o n u c l e u s . 7 . I n s t a l l i n g e g g n e e d l e a n d i n j e c t i o n n e e d l e m a k i n g t h e e n d p a r a l l e l t o l o a d i n g p l a t f o r m . D r o p p i n g o n e d r o p o f M 2 i n t h e c e n t r a l o f c o n c a v e s l i d e c o v e r i n g p a r a f f i n o i l a n d m o v i n g f e r t i l i z e d e g g s i n . T h e D N A b u b b l e s i n t h e i n j e c t i o n p i n s h o u l d b e a l l p r e v i o u s l y e l i m i n a t e d . 8 . U n d e r m i c r o s c o p e o f h i g h m a g n i f i c a t i o n m a k i n g t h e i n j e c t i o n n e e d l e t o u c h t h e f a l l o p i a n t u b e l e t t i n g D N A f l o w o u t s l o w l y a n d c o n t r o l l i n g t h e a i r f l o w . R e p e a t e d l y s u c k i n g a n d b l o w i n g t h e f e r t i l i z e d e g g m a k i n g i t s t a y i n t h e b e s t p o s i t i o n . I n j e c t i n g n e e d l e i n t o t h e m a l e p r o n u c l e u s o f f e r t i l i z e d e g g s u n t i l s e e i n g i t s e n l a r g e m e n t . P l a c i n g t h e i n j e c t e d a n d t h e n o n - i n j e c t e d e g g s s e p a r a t e d a v o i d i n g m i x i n g . A f t e r i n j e c t i o n a d d i n g 5 C O 2 a n d k e e p i n g t h e f e r t i l i z e d e g g s i n i n c u b a t o r w i t h 3 7 C 0 s t a t e m e n t . 9 . G i v i n g a n A n e s t h e s i a t o t h e d o n o r i n j e c t i n g 1 s o d i u m 0 . 0 1 m l / g t o t h e i n t r a p e r i t o n e a l p a r t . C o n n e c t i n g f a l l o p i a n t u b e a n d f i x i n g w i t h f a t t w e e z e r s . F i n d i n g t h e f a l l o p i a n t u b e o p e n i n g u n d e r t h e m i c r o s c o p e . G e t t i n g t h e s u r v i v a l f e r t i l i z e d e g g s a f t e r c u l t u r e . T h e m e t h o d t o g e t i s t o s u c k a l o n g e r p e r i o d o f M 2 a f t e r a b u b b l e a b s o r p t i o n a n d t h e n a b s o r b i n g f e r t i l i z e d e g g s . T r y i n g t o h a v e c l o s e s p a c e a s e c t i o n o f l i q u i d a b u b b l e a b s o r p t i o n a n d a n o t h e r s e c t i o n o f l i q u i d . T o t a l l y f o u r s e c t i o n s o f l i q u i d a n d t h r e e b u b b l e s . E x c e p t f o r t h e l o n g e r p e r i o d o f l i q u i d t h e r e m a i n i n g l i q u i d i s a b o u t 1 c m l o n g a n d t h e b u b b l e i s a b o u t 0 . 2 c m l o n g . I n s e r t i n g t h e t r a n s p l a n t e d n o z z l e i n t o t h e f a l l o p i a n t u b e g e n t l y b l o w i n n g t h e l i q u i d i n t o t h e t u b e g r a f t . W h e n s e e i n g f a l l o p i a n t u b e p o t a b d o m i n a l e n l a r g e m e n t a n d t h r e e b u b b l e s c l e a r l y i t m e a n s a s u c c e s s f u l t r a n s p l a n t a t i o n . R e t u r n i n g t h e o v a r i e s a n d f a l l o p i a n t u b e s t o t h e a b d o m i n a l c a v i t y s u t u r i n g t h e m u s c l e s a n d s k i n . 1 0 . T h e r e c e p t o r s h o u l d b e w e i g h e d o n c e a w e e k . W h e n t h e w e i g h t i n c r e a s e s y o u c a n d e t e r m i n e a n i n i t i a l p r e g n a n c y . 1 9 2 1 d a y s a f t e r t h e o p e r a t i o n t h e r a t s s t a r t t o d e l i v e r y . 3 w e e k s a f t e r t h a t s h e a r i n g e a r l i s t i n g s e r i a l n u m b e r s s h e a r i n g t a i l a n d d e t e c t i n g . T h e o r i g i n a l a r t i c l e : h t t p : / / w w w . q m e d . c o m / n e w s / s u p p l i e r / p r e p a r a t i o n - t r a n s g e n i c - m i c e