TP Galerie API 20E But principe et lecture

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TP GALERIE API 20E "ensemencement, lecture et interprétation."

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Fin :

GALERIE API 20E

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Introduction du test API20E   Un système standardisé pour l'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux, comprenant 21 tests biochimiques miniaturisés, ainsi qu'une base de données. La liste complète des bactéries qu'il est possible d'identifier avec ce système est présente dans le Tableau d'Identification en fin de notice.

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But du test API20E Permettant de réaliser 23 tests biochimiques afin d’identifier des bacilles Gram- appartenant à la famille des ENTEROBACTERIACEAE .

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Principe Avec l’once ,on prend une coloniee et on la mettre dans un tube contien 10 ml d’eau d’estillée ,puis a l’aide d’une pipette pasteur, on prend une quantité de ce mélange ( eau d’ estillé +une colonie bactérienne) et on verse dans une plaquette de test « Antibactérien API 20 » Prélèvement d’une souche pure sur GNI 1 seule colonie sur GO Souche pure sur GNI 5 mL d’eau distillée stérile

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On verse une quantité d’eau d’ estilée dans la boite pour maintenir l’humidité de galerie cette plaquette contient des tubes en cupule  : Recouvrir d’huile de paraffine Pour les tests : ADH , LDC , ODC , H 2 S , URE Remplir de suspension le tube&la cupule Pour les tests : CIT ,VP ,GEL le nom de tube encadré : Remplis le tube et cupule le nom de tube souligné : Remplis juste le tube, et dans la cupule On met l’huile de paraffine le nom de tube ni souligné ni encadré: Remplis juste le tube enfin on incube la boite « galerie » Pendant 24h à 37°C

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Après 24h d’incubation à 37°C, cupules dans lesquelles on doit rajouter des réactifs

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Test d’ONPG : Recherche de la  Bêta-galactosidase  ; Ce test permet donc de faire la différence pour une bactérie apparaissant lactose (-) entre les lactose (-) " vraie " de celles qui sont lactose (+) "l ente ". Mise en évidence de la béta-galactosidase Substrat : ONPG Réaction : ONPG + eau Galactose + orthonitrophénol jaune

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2. LDH,ODC,ADH Ces 3 enzyme ont un intérêt pour l'identification bactérienne (différenciation des entérobactéries et autres bacilles à Gram négatif): La lysine décarboxylase:  LDC L' ornithine décarboxylase:  ODC L'arginine dihydrolase :  ADH

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Mise en évidence de: -l'arginine désaminas - lysine décarboxylase - ornithine décarboxylase Substrats : - arginine (dans ADH) -lysine (dans LDC) - ornithine (dans ODC) Réactions : dégradations libérant des produits basiques Révélateur : rouge de phenol

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3. Citrate permet de mettre en évidence l'utilisation du citrate comme seule source de carbone et d'énergie.intéressant pour discriminer les bactérie entre-elles et ainsi de les identifier. Mise en évidence : de la dégradation du citrate comme seule source de carbone. Réaction : dégradation consommant des H+ donc responsable d’une alcalinisation. Substrat : citrate Révélateur : BBT

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Ce test détermine si le microbe réduit des composés soufrés en sulfures au cours du processus de métabolisme. Mise en évidence de production de sulfure Substrat : thiosulfate de sodium Révélateur : Fe 3+ Résultat positif : présence d’un précipité noir de sulfure de fer 4. Test H2S

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C’est un milieu d’ identification ,  synthétique , très important pour le diagnostic différentiel des espèces appartenant aux familles suivantes: Enterobacteriaceae- Pseudomonadaceae etc... Il permet la recherche de l’enzyme : l ’ uréase Mise en évidence de la présence d'une uréase Substrat : urée Réaction : urée + eau CO2 + 2 NH3, d’où alcalinisation. Révélateur : Rouge de phénol Lecture : attention un orange clair sera -, un orange foncé sera consi déré c omme + 5. Test d’urée

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C'est un milieu complexe qui fournit un ensemble de resultats utiles pour l'identification de nombreux germes bacteriens , notamment parmi les  Enterobacteriacea Mise en évidence : d'une tryptophane désaminase Substrat : Tryptophane Produit obtenu : Acide indol pyruvique Révélateur : - Réactif ajouté : Chlorure de fer III donnant un produit marron foncé en présence d’acide indol pyruvique 6. TDA

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7.Test Indole Mise en évidence d'une tryptophanase Substrat : Tryptophane Produit : Indole Révélateur : - Réactif ajouté : Kovacs (ou James)

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permet de mettre en évidence la production d’ acétoine ( acétyl méthyl carbinol ) à partir du glucose.  Mise en évidence de la production d' acétoïne , de 2,3 butane diol et de butane dione Substrat : Pyruvate Révélateur : - Réactifs ajoutés : VP1 et VP2 (1- naphtol et KOH) 8. Voges Proskauer:

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Résultats Tests négatifs Tests positifs après ajout des réactifs utiles Les 10 premiers tests

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Résultats Après ajout des réactifs Nit 1 et Nit 2 Les 10 derniers tests

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Se référer au catalogue pour identifier la souche à l’aide du code

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Résultats Se référer au catalogue pour identifier la souche à l’aide du code Lecture des résultats de la galerie

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Si vous aves besoin de ceci sous forme de word ou ppt dite le moi pour les ajoutez !! Disponible Merci pour votre attention

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