APLICACIONES DE LA PCR DE PUNTO FINAL por Roberto Amadio

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breve y somera descripcion del significado y aplicaciones de la reaccion en cadena de la polimerasa

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PCR (Reaccion en cadena de la polimerasa) y sus aplicaciones: 

PCR (Reaccion en cadena de la polimerasa) y sus aplicaciones Bioquimico Roberto Carlos Amadio Instituto de Biomedicina-UCSE INSTITUTO DE BIOMEDICINA UNIVERSIDAD CATOLICA DE SANTIAGO DEL ESTERO

ADN: 

ADN Acido Desoxiribonucleico Compuesta por A, G, C, T

PowerPoint Presentation: 

5´ 3´ 5´ 3´

PCR: 

PCR Amplificacion quimica automatizada de fragmentos de ADN.

Polimerasa Chain Reaction: Reacción en Cadena de la Polimerasa : 

Polimerasa Chain Reaction: Reacción en Cadena de la Polimerasa Fue diseñada por el Dr. Kary Mullis en 1978. Patentada en 1985 Utilizo la PCR para amplificación del gen de - hemoglobina humana, y el diagnostico prenatal de anemia falciforme. Ganó el premio Nóbel de Química en 1993 por su invento.

Requisitos: 

Requisitos Una DNA polimerasa termoestable (Taq) Termus aquaticus Tfl: termus flavus Pfu:pyrococcus furiosus

PowerPoint Presentation: 

Conocer la secuencia de interés (extremos) para fabricar los Primers = Iniciadores = Cebadores Secuencias cortas de ADNss de 20 bp aprox. IS 1001 r CGCCGCTTGATGACCTTGATA IS 1001 f CACCGCCTACGAGTTGGAGAT

Ciclador térmico: 

Ciclador térmico Tiene la capacidad de modificar la temperatura de manera cíclica y programable

Etapas de la reacción de PCR: 

Etapas de la reacción de PCR Desnaturalización Extensión annealing 94-95 ºC 72 ºC 55ºC Repetición del ciclo durante nº número de veces ADNds ADNss sintesis de nuevas hebras de DNA Tª critica de union de primers Componentes: DNA molde Buffer Mg++ DNA polimerasa Primers dNTPs Aditivos

Videos& animaciones: 

Videos& animaciones

Sistemas de revelado: 

Sistemas de revelado

Matriz de poliacrilamida: 

Matriz de poliacrilamida

Matriz de Agarosa: 

Matriz de Agarosa

PowerPoint Presentation: 

Agarosa (EtBr) Polacrilamida (AgNO3) 256bp 78bp 305bp LCR HCV

Variantes:: 

Variantes: PCR sscp: PCR RFLP: PCR RAPD: PCR aleloespecifica:

RFLP (polimorfismo de restriccion de fragmentos al azar): 

RFLP (polimorfismo de restriccion de fragmentos al azar) El amplificado es digerido por enzimas de restricción NEUQUEN MENEM 11 18

RAPD (Random Amplification of Polymorphic DNA) : 

RAPD ( R andom A mplification of P olymorphic D NA) Usa una colección de decanucleótidos para amplificar por PCR áreas específicas distribuídas al azar por el genoma. (36°C).

Secuenciación de ADN: 

Secuenciación de ADN

Secuenciación automática: 

Secuenciación automática

Otras aplicaciones: 

Otras aplicaciones Pcr secuenciacion: Pcr microsatelites:

MLPA (Mrc holland): 

MLPA (Mrc holland) Usa un solo par de primers universales con sondas especificas que reconocen secuencias (20-25) de ADN diferentes . Util en enfermedades geneticas y endocrinas como : Fibrosis quistica Hiperplasia suprarenal congenita cancer Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification

Pcr en tiempo real: 

Pcr en tiempo real qPCR :permite cuantificar el producto amplificado

Microarrays: 

Microarrays Sonda: secuencia corta de ADN (30 a 200 bp aprox.)

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCION!!: 

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCION!! ”Si tienen en vista una carrera científica no se engañen. La ciencia no es una opción fácil. Requiere mucha dedicación, trabajo, iniciativa y autocrítica constante”… Cesar Milstein – oct. 2001