Practical Infectious Diseases Diagnostic

Views:
 
Category: Education
     
 

Presentation Description

Practical Diagnostics with clinical data for infectious diseases of dogs and cats

Comments

Presentation Transcript

Actualitati in metodologia de Diagnostic Imunological Animalelor de Companie : 

Actualitati in metodologia de Diagnostic Imunological Animalelor de Companie Dr. Dragos Cobzariu Sef Lucrari, FMV Bucuresti e-mail dragoscobzariu@gmail.com

Etapele diagnosticului : 

Etapele diagnosticului Suspiciunea: Clinica pe baza sindroamelor EX: Sindromul de hipertermie( 20%clinic suspicionati de B.Carre-confirmati cu Babesia), prezent in peste 70 de afectiuni infectioase, parazitare, oncologice, obstetricale Morfopatologica (util in cazul animalelor de renta, tardiv pentru cele de companie) Epidemiologica (prezent pentru animalele de renta, inexistent la cele de companie) Confirmarea : Identificarea agentului cauzal Ag Identificarea trecerii prin boala Ac

METODE DE IMUNODIAGNOSTIC : 

METODE DE IMUNODIAGNOSTIC Practic folosite in diagnosticul de: CONFIRMARE - identificarea agentului patogen Ag CONFIRMARE - prin identificarea urmelor trecerii Ag prin organism-Ac (stabilirea responsabilitatii in litigii, eutanasiere) Identificarea statusului imun: pentru animalele nou acizitionate cu status imun necunoscut(recomandabil a se efectua testarea inaintea primei vaccinari. Stabilirea remanentei – anticorpilor si a perioadei optime de vaccinare( evita limfoamele-leucemiile consecutive hiperimunizarii) Identificarea structurii antigenice a unui agent patogen-utilizate in cercetare identificarea de noi metode de diagnostic imbunatatite

Principiul diagnosticului de certitudine : 

Principiul diagnosticului de certitudine Specificitatea cuplului antigen-anticorp Ag-Ac vizualizata cu ajutorul unui cromogen (pentru fiecare antigen din natura organismele superioare sintetizeaza un anticorp specific). Antigenii -(Ag) corpuscular: bacterii, virusuri, paraziti(denumiti si aglutinogeni) molecular: secretii, toxine, flageli (denumiti si precipitinogeni) Anticorpii -(Ac)(IgM,IgG) identificati în diferite medii ale organismului, secretii si excretii ale acestuia(probele de analizat): serul sanguin, sângele, plasma,laptele, secretiile vaginale, secretiile lacrimale, fecale, urina.

Anticorpii -(Ac) : 

Anticorpii -(Ac) Dupa origine anticorpii sunt : Maternali (IgG) Postinfectiosi(IgM,IgG) Postvaccinali(IgM,IgG) Imunoglobulina M-IgM IgM sunt primele imunoglobuline generate atunci cand organismul intra in contact cu un antigen. Glicoproteina cu functie de anticorp care caracterizeaza faza acuta a bolii infectioase, apare in organism dupa 7-14 zile de la infectie si are o durata de viata dupa producerea in organism de aproape 30-40 de zile.

Imunoglobulina G- IgG IgG se sintetizeaza in organismul animal in contact cu antigenul, dupa IgM. IgG este singura imunoglobulina care traverseaza placenta, asigurand astfel protectia fetusului in primele luni de viata. IgG apare in organism dupa 10-14 zile si are o durata de viata de pana la 11-15 luni titrul sau reducandu-se semnificativ dupa aceasta perioada. IgG activeaza sistemul complement, produce liza celulelor bacteriene si a particulelor virale, are rol opsonizant si de neutralizarea a toxinelor bacteriene.

Prezenta sau absenta anticorpilor Ac in probele analizate nu concluzioneaza prezenta sau absenta bolii cercetate. Trebuie facuta corelatia cu datele clinice, anamnetice si epidemiologice ale bolii incriminate, pentru a stabili tipul de test ce trebuie folosit. Rezultatul examenului serologic trebuie sa ia în calcul: Prezenta Ac-lor materni( 7-9) saptamani dupa fatare) Prezenta Ag-nilor vaccinali pana la 30 de zile( reactii fals pozitive) Momentul investigatiei fata de momentul infectiei (daca a fost timp sa se produca restructurari imunologice 7-21 de zile-IgM), Vârsta animalului - maturizarea sistemului imun asociata cu timpul necesar formarii de anticorpi proprii. Momentul infectiei: in unele cazuri infectia în timpul perioadei de gestatie generaza riscul aparitiei de nou-nascuti cu toleranta imunologica la antigenul ce a produs infectia mamei, si aparitie precoce a semnelor clinice.

Valoarea diagnosticului de certitudine : 

Pentru a avea valoare de diagnostica un test trebuie sa întruneasca doi parametri fara de care testul nu poate fi folosit: Specificitatea = capacitatea unui test de a furniza un raspuns pozitiv(+) la un individ infectat. Sensibilitatea = capacitatea unui test de a furniza un raspuns negativ(-) la un individ indemn. Pentru a compara doua metode de diagnostic serologic ( provenite de la 2,3 producatori), este esential sa le testam fata de aceeasi metoda de referinta-PCR standard sau Real Time. ( trebuie verificate practic specificatiile tehnice declarate de producator) Nu uitati!: Specificitatea, sensibilitatea si repetitivitatea stabilesc: Valoarea diagnostica a unui test . Valoarea diagnosticului de certitudine

Testele utilizate in Practica : 

Testele utilizate in Practica 1.Testele Rapide 2. ELISA 3. Teste tip Immunocomb 4 . Determinarea Dermatofitilor cutanati 5 .Determinarea Grupelor sanguine 6. Determinarea alergenilor-tratamente imunologice-Agroskin

Teste Rapide : 

Teste Rapide 1. Principalele boli in care sunt folosite teste Rapide pentru Caini si Pisici - Distemper IC - Ehrlichia IC - Heartworm IC - Leishmania IC - Parvo IC - FeLV - FIV - FeLV/FIV IC - FPV IC

Ce sunt testele rapide imunocromatografice?Mod de Lucru : 

Ce sunt testele rapide imunocromatografice?Mod de Lucru Specificitatea Ag-Ac vizualizata cu ajutorul unui cromogen Protocol de lucru foarte simplu Rezultate furnizate în 10 -30 minute

Tipuri de teste : 

Tipuri de teste Identificare-Ac IgM Identificare-Ac IgG Detectie Ag Monovalente Bivalente Trivalente

Boala Carré-Distemper : 

Boala Carré-Distemper Caracteristici tehnice Agentii patogeni decelati 1-Virusul Carre Tipul(Ag-Ac) Ag Anticorpii monoclonali Specifici bolii Carre Depozitare 18 - 25 °C Garantie 18 luni Proba de analizat Ser, secretii oculare, nazale Timpul de lucru 15 minute inclusiv citirea rezultatului Specificitate 98,6% Sensibilitate 98,6% comparativ cu PCR 100% Virusul se transmite prin inhalare directa de la animalul infectat, inflamatia catarala a cailor respiratorii digestive este urmata de manifestari nervoase severe, pareze, paralizii, moarteaanimalului. Boala este confirmata in peste 50% din suspiciunile clinice. Imunitatea colostrala, postvaccinala, interfera cu tehnicile de diagnostic bazate pe detectia anticorpilor. Diagnosticul Ag se poate face chiar de la sfarsitul perioadei de incubatie(3-7 zile) cand sunt eliminate cantitati mici de virus, si debuteaza simptomatologia caracteristica peroadei de viremie, hipertermia, inapetenta.

Erlichioza canina : 

Erlichioza canina Caracteristici tehnice Agent patogen 1-Erlichia Canis Tipul(Ag-Ac) Ac Anticorpii monoclonali p32 proteina recomb. Depozitare 18 - 25 °C Garantie 18 luni Proba de analizat Sange, Ser, plasma Timpul de lucru 15 minute inclusiv citirea rezultatului Specificitate 100% de diagnostic al seropozitivilor cu titrul peste >1:120 Ac/ml Interpretarea titrului Titrul <1:50 = Neg. 35% - Poz. 65% Titrul 1:60 -1:120 = Neg. 24%-Poz. 76% Titrul 1:120 -1:320 =Neg.0%-Pos. 100% Titrul 1:320 = Neg. 0% - Pos. 100% Erlichioza canina este o boala bacteriana in care sunt afectate leucocitele. Boala este transmisa prin intermediul capuselor (Rhipicephalus sanguineus). Are o prevalenta crescuta in zonele endemice –bazinul Mediteraneean de peste 20%, evolueaza asociat cu Leishmanioza canina. Dupa o faza acuta de 1-4 saptamani evoueaza cronic fiind suspicionata prin modificari ale hemo-leucogramei, anemie, hypoproteinemie.

Dirofilarioza canina-Heartworm : 

Dirofilarioza canina-Heartworm Caracteristici tehnice Agent patogen 1-Dirofilaria Immitis Tipul(Ag-Ac) Ag Anticorpii monoclonali impotriva glicoproteinei cuticulare Depozitare 18 - 25 °C Garantie 18 luni Proba de analizat Sange, Ser, plasma Timpul de lucru 15 minute inclusiv citirea rezultatului Specificitate 100% Sensibilitate 98,8% Principalii vectori transmitatori ai microfilariilor sunt tantarii(Culicidae) Semnele clinice apar dupa cateva luni de la infectie. Detectia anticorpilor circulanti conduce catre un diagnostic de dirofilarioza cu adulti localizati in cord acestia ajungand pana la 20-30 cm lungime. Se recomanda a se efectua diagnosticul la toate canidele ce manifesta semne clinice de oboseala, cardiopatii, accidente vasculare, embolii, pareze-hemipareze .

Leishmanioza canina : 

Leishmanioza canina Caracteristici tehnice Agent patogen Leishmania Infantum Tipul(Ag-Ac) Ac Anticorpii monoclonali Proteina Recombinata Depozitare 18 - 25 °C Garantie 18 luni Proba de analizat Sange, Ser, plasma Timpul de lucru 15 minute inclusiv citirea rezultatului Boala parazitara a cainelui, provocata de infestarea cu un protozoar flagelat din genul Leishmania. Protozoarele traiesc si se multiplica in anumite celule ale sangelui si ale maduvei osoase si distrug celulele respective. Leishmanioza viscerala este frecventa in regiunile tropicale si mediteraneene. Contaminare - leishmanioza viscerala se transmite prin intepatura insectelor. Simptome - incubatia este variabila, de la cateva saptamani la cateva luni, chiar mai multi ani, dupa statusul imunitar al purtatorului. Simptomele apar treptat: slabire, oboseala, anemie, schiopaturi, artrite, dispnee si mai ales febra cu picuri de temperatura de 4O-41°C si scaderi mai mult sau mai putin rapide. Volumul ficatului si al splinei cresc, limfadenita, diaree, pete cutanate.

Parvoviroza canina : 

Parvoviroza canina Caracteristici tehnice Agent patogen CanineParvovirus Tipul(Ag-Ac) Ag Anticorpii monoclonali Specifici CPV Depozitare 18 - 25 °C Garantie 18 luni Proba de analizat Fecale Timpul de lucru 15 minute inclusiv citirea rezultatului Specificitate 100% Sensibilitate 100% Parvovirusul produce infectii intestinale severe, la cateii ci varste cuprinse intre 6-12 saptamani, cand scade titrul IgG dobanditi de la mama. Este esentiala capacitatea testului de a detecta Ag inca de la debutul semnelor clinice. Testul este deosebit de folositor in canise cand exista riscul infectiilor endemice in populatiile de catei.

FeLV-feline : 

FeLV-feline Caracteristici tehnice Agent patogen Feline Leukemia Virus Tipul(Ag-Ac) Ag -p27 Anticorpii monoclonali Specifici Ag-p27 Depozitare 18 - 25 °C Garantie 18 luni Proba de analizat Sange, plasma,ser Timpul de lucru 15 minute inclusiv citirea rezultatului Boala caracterizata prin semne clinice sterse si inconstante. Diagnosticul diferential fata de FIV si Coronaviroza felina, studiile arata o prevalenta variabila intre 1-20% a FeLV. Detectia antigenelor virale solubile face posibila detectia precoce a infectiei la titruri mici in fazele de viremie, infectia recenta. Testul este deosebit de folositor in felise cand exista riscul infectiilor prin introducerea de indivizi infectati purtatori asimptomatici.

FIV-feline : 

FIV-feline Caracteristici tehnice Agent patogen Feline Imunodeficienta Virus Tipul(Ag-Ac) Ac -p24 Anticorpii monoclonali Specifici Ac-p27 Depozitare 18 - 25 °C Garantie 18 luni Proba de analizat Sange, plasma,ser Timpul de lucru 15 minute inclusiv citirea rezultatului Boala caracterizata prin dezvoltarea clinica a sindromului de imunodeficienta semne clinice sterse si inconstante. Studiile arata o prevalenta variabila intre 4-6% a FIV, poate ajunge pana la 40%la pisici de strada. Detectia antigenelor virale FIV solubile face posibila detectia precoce a infectiei la titruri mici, testul poate fi folosit ca recomandare inaintea vaccinarii anuale, precum si inaintea efectuarii interventiilor chirurgicale. Testul este deosebit de folositor in felise cand exista riscul infectiilor prin introducerea de indivizi infectati purtatori asimptomatici. Poate fi folosit pentru a identifica posibila expunere la infectie ca si repetare a testarii dupa o perioada de 60 de zile.

FPV-feline (PIF, CoF) : 

FPV-feline (PIF, CoF) Caracteristici tehnice Agent patogen Feline Peritonitis Virus Tipul(Ag-Ac) Ag Anticorpii monoclonali Specifici impotriva PIF Depozitare 18 - 25 °C Garantie 18 luni Proba de analizat Sange, plasma,ser Timpul de lucru 15 minute inclusiv citirea rezultatului Specificitate 98,4% Sensibilitate 100% Repetitivitate 100% Boala produsa de coronavirusul felin, seroprevalenta variaza intre 10-40%, insa doar 5-15% dezvolta pritonita infectioasa cu o simptomatologie clinica, celelalte pisici raman putratoare si excretoare de lunga durata. Testul este deosebit de folositor in felise pentru diagnosticarea purtatori asimptomatici. Poate fi folosit pentru a identifica posibila expunere la infectie ca si repetare a testarii dupa o perioada de 60 de zile.

2. Tehnica Elisa : 

2. Tehnica Elisa Principiul ELISA: detectarea anticorpilor Ac sau a antigenelorAg prin intermediul enzimelor, folosind reactia clasica antigen-anticorp, enzimele modificând culoarea substratului specific lor. Avantaje: deosebit de specifica – permite identificarea unui reagent în cantitati foarte mici (nanograme); tehnica de prelucrare a reagentilor permite o mare stabilitate a acestora; larga utilizare în diagnosticul calitativ si/sau cantitativ al bacteriilor, virusurilor, ciupercilor, parazitilor sau pentru controlul vaccinurilor

Teste Elisa-dedicate laboratoarelor de Diagnostic : 

Teste Elisa-dedicate laboratoarelor de Diagnostic 1.Teste ELISA folosite in diagnosticul bolilor cainlor - Parvo Ab - Parvo Ag - Distemper IgG - Distemper IgM - Heartworm Ag - Coronavirus Ab - Leptospira Ab(canicola, icterohemoragiae) - Leishmania Ab - Borrelia afzelii Ab - Borrelia burgdorferi Ab - Ehrlichia canis Ab - Rickettsia conori Ab - Rickettsia rickettsii Ab - Progesteron Ag 2. Teste ELISA folosite in diagnosticul bolilor pisicilor - FLV - FIV - Coronavirusul felin


Teste ELISA pentru diagnosticul bolilor canidelor : 

Teste ELISA pentru diagnosticul bolilor canidelor Parvoviroza canina Ag-Ac

Teste ELISA pentru diagnosticul bolilor canidelor : 

Teste ELISA pentru diagnosticul bolilor canidelor Distemper IgG-IgM

Leishmanioza : 

Leishmanioza

Dirofilarioza : 

Dirofilarioza

Coronaviroza Canina : 

Coronaviroza Canina

Borelioza (B.afazelii-burgdorferi) : 

Borelioza (B.afazelii-burgdorferi)

Erlichioza- Erlichia canis : 

Erlichioza- Erlichia canis

Ricketsioza (conori rickettsii) : 

Ricketsioza (conori rickettsii)

FeLV (leucemia felina)Ac-Ag : 

FeLV (leucemia felina)Ac-Ag

Fiv(imunodeficienta felina)Ac : 

Fiv(imunodeficienta felina)Ac

3.Teste tip Immunocomb : 

3.Teste tip Immunocomb Protocol de Lucru Transferul “pieptenului” 20 min – A 2 min – B 20 min – C 2 min – D 2 min – E 10 min – F 2 min - E Citire rezultat Sus: calibrare Jos: interpretare

4 . Determinarea Dermatofitilor cutanati la caini pisici si cai -DERMAKIT : 

4 . Determinarea Dermatofitilor cutanati la caini pisici si cai -DERMAKIT Deosebit de stabil-pana la 3 ani la temperatura camerei Contine nutrientii necesari dezvoltarii dermatofitilor, antibioticeselective -conservanti impotriva florei microbiene din mediu. Contine un indicator de ph-ce semnaleaza modificarea-alcalinizarea lui sub actiunea:Tricophiton, Epidermophiton, in majoritatea cazurilor aceasta se produce dupa 72 de ore. Se pastreaza la temperatura camerei, se incubeaza la temperatura camerei(20grade Celsius), rezultatele fiin obtinute rapid .

5 . Determinarea grupelor sanguine la;A.-caine -sistemul DEA1.1 : 

5 . Determinarea grupelor sanguine la;A.-caine -sistemul DEA1.1 Este acceptata international clasificarea grupelor sanguine dupa sistemul DEA(Dog Eritrocite Antigen) fiind identificate in acest fel 8 antigene pe suprafata eritrocitelor. Cainii tolereaza in general bine o prima transfuzie cu o grupa sanguina incompatibila, insa dezvolta rapid producerea de anticorpi anti-eritrocitari astfel ca o a doua transfuzie poate produce moartea animalului transfuzat. RapidVet-H are la baza reactia de aglutinare care apare cand un eritocit ce contine antigene DEA1.1 pe suprafata sa interactioneaza cu anticorpii monoclonali specifici cu care este impregnat cardul-suport al reactiei. Toate eritrocitele DEA1.1 pozitive reactioneaza cu antiserul producand aglutinarea. Antiserul nu reactioneaza cu eritrocitele DEA1.1 negative. In practica este necesara Identificarea inca din primele saptamani de viata a cateilor DEA1.1 pozitivi sau negativi da indicatii despre posibilitatile de transfuzare la nevoie: infectia cu parvovirus, babesia, interventii chirurgicale, traumatisme grave cu pierderi de sange.

5 . Determinarea grupelor sanguine la;-pisica -sistemul A,B, AB : 

5 . Determinarea grupelor sanguine la;-pisica -sistemul A,B, AB Testul are la baza aglutinarea ce se produce cand eritrocitul ce contine antigenele A, B, AB, pe suprafata membranei interactioneaza cu antiserul specific liofilizat. Pisicile tip B –au cantitati mari de anticorpi specifici ai tipului A de sange. Rapid-Vet-H foloseste anticorpii pentru recunoastrea tipului a de sange. Anticorpii aglutineaza antigenul specific al tipului A de sange. Pisicile tip A –au cantitati mari de anticorpi specifici ai tipului B de sange. In ambele cazuri, antiserul liofilizat impregnat in cardul suport este reconstituit si mixat cu sangele integral al pacientului. Eritrocitele tipurilor A,B,AB reactioneaza cu antiserul specific producandu-se aglutinarea lor, vizualizata la nivelul cardului de lucru .

6.Teste alergice la caini pisici Agroskin : 

6.Teste alergice la caini pisici Agroskin Bolile alergice ale câinilor si pisicilor Testul are la baza principiul eliberarii mediatorilor chimici ai inflamatiei: histamina de pe suprafata mastocitelor in urma cuplarii IgE cu alergenul specific, aceasta va duce la indurarea cutisului eritem ceea ce indica sensibilitatea animalului la alergeni. Câinii si pisicile, sufera de reactii alergice. Mai mult de 50% din alergii nu sunt tratate corspunzator.Simptomele se agraveaza toamna si primavara, datorita concentratiei crescute de micro-alergeni în aer în aceste anotimpuri. Dupa o examinare clinica si paraclinica completa, medicul veterinar decide daca sunt necesare testari pentru reactii alergice. Clinic alergenii declanseaza reactii la contactul cu pielea, inhalare sau ingestie, animalele alergice poseda cantitati mari de anticorpi IgE impotriva alergenilor specifici, anticorpi ce determina la a doua intalnire cu alergenul reactii severe de tipul: iritatie a pielii, insotite de prurit si scarpinare, in special in zone cu piele fina, eritem in zonele cu piele fina, umflaturi pe bot, pavilioanele urechilor, abdomen, edem pulmonar. Tratamentul Tratamentul consta in principal in evitarea alergenilor, uneori insa este dificil de realizat. Antiinflamatoarele steroidiene se folosesc frecvent pentru reducerea simptomelor, dar utilizarea acestora pentru mult timp are multiple efecte secundare. Desensibilizarea este o alta alternativa, executata cu ajutorul unui tratament individualizat, special conceput pentru pacientul canin sau felin pe baza rezultatelor testarii. Alergiile alimentare consecutive ingestiei de alimente alergizante au ca baza de tratament eliminarea alergenilor din hrana, si hranirea cu produse exclusiv fara alergeni. Testarea Alergenii sunt sub forma de baterii de alergeni in solutie apoasa sterila. Sunt prezente mai multe combinatii de alergeni sub forma unor kituri, in functie de aria geografica, fiind peste 50 de alergeni disponibili pentru testarea animalelor:

Agroskin-Alergenii diagnosticabili : 

Agroskin-Alergenii diagnosticabili

Agroskin-Alergeni : 

Agroskin-Alergeni Agroskin este un test alergic intradermic, contraindicat la -pacientii in tratament cu antihistaminice si corticosteroizi, medicamente ce prin actiunea lor determina reactii pseudoalergice sau paraalergice. Interpretarea testului se face pe o scara de la +1-la +4 prin masurarea diametrului reactiei la locul inocularii.

Agroskin-Imunoterapia : 

Agroskin-Imunoterapia

Concluzii1.Profilaxia corect aplicata reduce incidenta bolilor infectioase2.Asigurati-va ca vaccinati un animal sanatos prin efectuarea unui diagnostic de control inaintea vaccinarilor.3.Asigurati-va ca dispuneti de toate datele Epidemiologice legate de evolutia anumitor boli, in arealul-zona in care va desfasurati activitatea.4.Informati proprietarii de animale in legatura cu necesitatea vaccinarilor-diagnosticului, oferind exemple palpabile(costuri mult mai mari cu tratamentul comparativ cu preventia, tararea animalelor)5.Solicitati informatii legate de diagnostic-preventie-tratamentprecum si costurile acestora producatorilor-distribuitorilor in domeniu.6.Un diagnostic pentru o boala infectioasa poate fi fals pozitiv daca se efectueaza la mai putin 30 de zile de la vaccinare!7.Administrarea imunoglobulinelor Ac –de sinteza in ultimele faze ale bolii Carre nu este justificata datorita intensei imunizari in urma trecerii prin boala, semnele clinice fiind urmarea distrugerilor neuronale. : 

Concluzii1.Profilaxia corect aplicata reduce incidenta bolilor infectioase2.Asigurati-va ca vaccinati un animal sanatos prin efectuarea unui diagnostic de control inaintea vaccinarilor.3.Asigurati-va ca dispuneti de toate datele Epidemiologice legate de evolutia anumitor boli, in arealul-zona in care va desfasurati activitatea.4.Informati proprietarii de animale in legatura cu necesitatea vaccinarilor-diagnosticului, oferind exemple palpabile(costuri mult mai mari cu tratamentul comparativ cu preventia, tararea animalelor)5.Solicitati informatii legate de diagnostic-preventie-tratamentprecum si costurile acestora producatorilor-distribuitorilor in domeniu.6.Un diagnostic pentru o boala infectioasa poate fi fals pozitiv daca se efectueaza la mai putin 30 de zile de la vaccinare!7.Administrarea imunoglobulinelor Ac –de sinteza in ultimele faze ale bolii Carre nu este justificata datorita intensei imunizari in urma trecerii prin boala, semnele clinice fiind urmarea distrugerilor neuronale.

Va multumesc !Dr. Dragos CobzariuDVM PhDBoli Infectioase Sef Lucrari, FMV Bucurestie-mail dragoscobzariu@gmail.com : 

Va multumesc !Dr. Dragos CobzariuDVM PhDBoli Infectioase Sef Lucrari, FMV Bucurestie-mail dragoscobzariu@gmail.com

authorStream Live Help