PRESENTACION LAB INMUNOLOGIA (PPTshare)

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LABORATORIO DE INMUNOLOGIA. Dra. Andrea Sakurada Z. Hospital Clínico Universidad de Chile Hospital Dr. Sótero del Río

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En el laboratorio de Inmunología existen diferentes técnicas que permiten entregar resultados de exámenes para apoyo al diagnóstico y tratamiento clínico de las diferentes enfermedades inmunológicas, reumatológicas y mesenquimopatías en general.

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ESTAS TECNICAS LAS PODEMOS DIVIDIR EN 4 GRANDES GRUPOS

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DETERMINACION DE ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (ANA) DETERMINACION DE ANTICUERPOS ANTI DNA(n) (DNA) DETERMINACION DE ANTICUERPOS ANTIMITOCONDRIALES (AMA) 1- TECNICAS DE AUTOINMUNIDAD

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CUANTIFICACION DE INMUNOGLOBULINA G (IgG) CUANTIFICACION DE INMUNOGLOBULINA A (IgA) CUANTIFICACION DE INMUNOGLOBULINA M (IgM) 2- TECNICAS NEFELOMETRICAS

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COMPLEMENTO C3 (C3) COMPLEMENTO C4 (C4) FACTOR REUMATOIDEO (FR) ANTIESTREPTOLISINA O (ASO) 2- TECNICAS NEFELOMETRICAS

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ELECTROFORESIS DE PROTEINAS SERICAS (EF) 3- TECNICAS ELECTROFORETICAS

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FISICO-QUIMICO (LA) CITOLOGICO (LA) ESTUDIO DE CRISTALES CON LUZ POLARIZADA 4- TECNICAS DE ESTUDIO DEL LIQUIDO ARTICULAR

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1- TECNICAS DE AUTOINMUNIDAD TECNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA (IFI) La IFI permite la detección de auto anticuerpos circulantes contra antígenos tisulares como: Anticuerpos antinucleares (ANA) Anticuerpos anti DNA(n) (DNA) Anticuerpos antimitocondriales (AMA)

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La determinación de anticuerpos anti nucleares y anti citoplasmáticos a través de la técnica de IFI consiste en:

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Colocar suero del paciente en un porta objeto que contiene el sustrato. Se produce la unión de los auto anticuerpos específicos. La unión Ag-AC se evidencia con un conjugado (FITC) anti IgG humana, marcada con isotiocianato de fluoresceína. La lectura se realiza con microscopio de fluorescencia con luz incidente, donde se puede observar el color verde manzana en las muestras positivas.

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INFORME DE RESULTADO DE EXAMENES Negativo (-) Positivo (+) Todos los exámenes positivos se titulan a punto final (se informa el título de la última dilución). Se coloca el nombre del sustrato de elección y el nombre de la técnica.

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CARACTERISTICAS DEL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA Fluorescencia: La emisión de luz ocurre solamente cuando la luz de excitación está presente. Fuente de luz: Lámpara de mercurio de alta presión 100 W

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ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (ANA) La determinación de anticuerpos antinucleares es esencial para el diagnóstico de: Lupus eritematoso sistémico (LES). Enfermedad mixta del tejido conectivo. Lupus eritematoso sistémico inducido por drogas. Hepatitis crónica activa autoinmune. Esclerosis sistémica progresiva. Síndrome de Crest. Artritis reumatoide. Dermatomiositis.

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El sustrato de elección son las células Hep-2 provenientes de carcinoma de laringe humana, donde podemos evidenciar los diferentes PATTERN DE FLUORESCENCIA, que generalmente se asocian a algunas de las patologías antes mencionadas.

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PATTERN HOMOGENEO: Se observa en el 60 a 70 % de los lupus eritematoso sistémico. En el 100 % del lupus inducido por drogas.

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PATTERN PERIFERICO: Se observa en proporción variable en el lupus eritematoso sistémico.

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PATTERN MOTEADO: Se observa en el 100% de la enfermedad mixta del tejido conectivo.

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PATTERN NUCLEOLAR: Se observa en el 90 a 100 % en la esclerosis sistémica progresiva.

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PATTERN ANTICENTROMERO Se observa en el 90 a 100% en el síndrome de Crest.

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ANTICUERPOS ANTI-DNA(n) La determinación de anticuerpos anti-DNA(n) de doble hebra, se utiliza para la confirmación de LUPUS ERITEMATOSO SISTEMICO ACTIVO. El sustrato de elección es la Crithidia luciliae, que es un protozoo que se encuentra en la glándulas salivales de las moscas y que tiene un kinetoplasto rico en DNA(n) nativo de doble hebra.

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ANTICUERPOS ANTIMITOCONDRIALES (AMA) La determinación de AMA es de utilidad en el diagnóstico de : Cirrosis biliar primaria (altos títulos) Hepatitis crónica activa (bajos títulos)

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El sustrato de elección es riñón de rata. Se Puede observar la fluorescencia en el citoplasma de las células de los túbulos renales que es un tejido rico en mitocondrias. En células Hep-2 podemos observar un pattern de fluorescencia positivo sugerente de anticuerpos anti-mitocondriales.

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2- TECNICAS NEFELOMETRICAS La nefelometría es una técnica automatizada que permite cuantificar proteínas del suero y otros líquidos biológicos. Tiene una alta sensibilidad y precisión. Los nefelómetros miden la luz dispersa, la reacción de inmunoprecipitación es producida por el complejo antígeno-anticuerpo.

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CUANTIFICACION DE INMUNOGLOBULINAS IgG, IgA, IgM Nos orienta como está reaccionando el sistema de defensa específico humoral. Los niveles de cada una de ellas pueden estar aumentados o disminuidos dependiendo del tipo de patologías en las cuales estén involucradas.

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CUANTIFICACION DE INMUNOGLOBULINAS IgG, IgA, IgM

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El complemento C3 y C4 se encuentra: Disminuido Lupus eritematoso sistémico Glomerulonefritis Aumentado procesos inflamatorios (artritis reumatoide) COMPLEMENTO C3 COMPLEMENTO C4

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Es un conjunto de unas 30 proteínas del plasma y otros líquidos orgánicos que interaccionan entre sí y con otros componentes del sistema de inmunidad innata y adaptativa, éstas se encuentran en forma inactiva y se activan de forma secuencial para mediar una serie de reacciones inmunológicas. SISTEMA DEL COMPLEMENTO

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Este es un sistema de activación enzimático en cascada, el producto de una reacción es a su vez una enzima para la siguiente reacción, produciéndose una respuesta rápida y amplificada del estímulo inicial, con la finalidad de producir la lisis celular. SISTEMA DEL COMPLEMENTO

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La vía clásica que corresponde al sistema de inmunidad adaptativa La vía alternativa que corresponde al sistema de inmunidad innata La vía de las lectinas que corresponde al sistema de inmunidad innata EL COMPLEMENTO SE ACTIVA POR TRES VIAS DIFERENTES

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Las tres vías comparten las últimas fases, consistentes en el ensamblaje, sobre la superficie del microorganismo, del denominado complejo de ataque a la membrana. EL COMPLEMENTO SE ACTIVA POR TRES VIAS DIFERENTES

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Esta vía se activa cuando se forman complejos Ag-AC. Los anticuerpos solubles o libres no activan el complemento. La activación de la vía clásica comienza por la unión del complejo C1 a anticuerpos unidos a antígenos .La vía clásica conecta con el sistema inmune adaptativo por medio de su interacción con inmunocomplejos. VIA CLASICA

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Esta vía no necesita anticuerpos para activarse, por lo que es un mecanismo de defensa importante en las etapas iniciales de la infección cuando todavía no se han sintetizado cantidades importantes de anticuerpos. Se activa directamente sobre la superficie de muchos microorganismos. VIA ALTERNATIVA

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Opera varios días antes de que entre en acción la vía clásica (la clásica tiene que esperar a que se hayan producido anticuerpos).La vía alternativa conecta con el sistema de inmunidad innata, interaccionando directamente con la superficie del microorganismo. VIA ALTERNATIVA

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Reconocida recientemente como una tercera forma de iniciar la activación del complemento, consiste esencialmente en una forma distinta de activar los componentes C2 y C4 de la vía clásica. VIA DE LAS LECTINAS

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La vía de las lectinas es una variante de la vía clásica, se activa sin la presencia de anticuerpos, se activa por medio de una MBP (proteína de unión a manosa) que detecta residuos de este azúcar en la superficie bacteriana, y activa al complejo C1qrs. El resto de la vía es similar a la clásica y por lo tanto pertenece al sistema de inmunidad innata. VIA DE LAS LECTINAS

SISTEMA DEL COMPLEMENTO : 

SISTEMA DEL COMPLEMENTO

SISTEMA DEL COMPLEMENTO : 

SISTEMA DEL COMPLEMENTO

SISTEMA DEL COMPLEMENTO : 

SISTEMA DEL COMPLEMENTO

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FACTOR REUMATOIDEO El FR son autoanticuerpos dirigidos contra los determinantes antigénicos del fragmento Fc de la molécula Ig G. El FR puede ser IgG, IgM, IgA. El mas frecuente es el IgM. Es de utilidad en el diagnóstico de Artritis Reumatoide donde se encuentra aumentado.

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ANTIESTREPTOLISINA O El Streptococcus B-hemolítico del grupo A, produce un número de exotoxinas, que pueden actuar como antígenos una de estas es la estreptolisina O. En una infección estreptocócica reciente la antiestreptolisina O se halla elevada en el 80% de los casos. Su determinación es importante en pacientes con: Fiebre reumática Glomerulonefrítis

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3- TECNICAS ELECTROFORETICAS La electroforesis de proteínas plasmáticas es la migración y separación de estas por la acción de un campo eléctrico. Las proteínas migran del polo (-) cátodo al polo (+) ánodo La EF es muy importante en el diagnostico de: -Mieloma Múltiple -Hipogamaglobulinemias -Síndrome Nefrótico

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4- TECNICAS DE ESTUDIO DEL LÍQUIDO ARTICULAR FISICO-QUIMICO (LA) CITOLOGICO (LA) ESTUDIO DE CRISTALES CON LUZ POLARIZADA (LA)

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-El Liquido articular es un ultrafiltrado del plasma que posee casi todos los elementos de este, excepto factores de la coagulación. -El médico obtiene la muestra por una artrocentesis aséptica de alguna de las articulaciones que se desee puncionar. -Se coloca en un tubo estéril con heparina como anticoagulante (3 gotas de heparina por ml de LA)

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EL ESTUDIO DEL LA ES IMPORTANTE PARA EL DIAGNOSTICO DE -Artritis inflamatorias -Artritis séptica -Artritis por cristales: Cristales de urato monosódico. Diagnostico de Gota Cristales de Pirofosfato de Calcio. Diagnostico de Seudogota o Condrocalcinosis

OTRAS TÉCNICAS INMUNOLOGICAS : 

OTRAS TÉCNICAS INMUNOLOGICAS Medición de Antígeno-Anticuerpo: Reacciones de aglutinación. Reacciones de precipitación. Nefelometría. ELISA

TÉCNICA DE ELISA : 

TÉCNICA DE ELISA