Anticuerpos.Monoclonales

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Anticuerpos monoclonales

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Anticuerpos Monoclonales: 

Anticuerpos Monoclonales

Anticuerpos monoclonales: 

Anticuerpos monoclonales Preparación de inmunoglobulina monoclonal con especifico efecto directo sobre un antigeno definido como target La producción es basada en tecnología de “DNA recombinante ”

Complejidad de los Productos Biológicos: 

Aspirin Complejidad de los Productos Biológicos Anticuerpo Monoclonal

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Eritropoietin Aspirina Glicosilación, Acilación, etc. Desnaturalización, Agregación, Degradación, Oxidación, ... Tamaño Estructura Modificaciones Estabilidad Complejidad intrínseca Productos Biológicos

Características: 

Características Policlonales Mezcla heterogénea. Variación. Irrepetibles. Se usan antigenos. Reconocen varios epitopos Fácil producción Baratos. Monoclonales Químicamente puros. Invariables. Producción ilimitada. No se necesitan Ags. Purificados. Muy específicos. Un solo isotipo. Producción compleja. Caros

Tecnología anticuerpos monoclonales: 

Tecnología anticuerpos monoclonales

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Manufactura de Productos Biológicos ADN  ARN  Proteína

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DNA Vector ATG Stop MCB, WCB (génesis del Banco Celular Maestro -MCB- y de Trabajo -WCB- únicos, adecuados para una fermentación en gran escala) Banco Celular de Trabajo Amplificación Manufactura de Productos Biotecnológicos Banco Celular Maestro

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Banco de Trabajo Tren de Producción de 20-12,000L Centrifugas de recolección Rotadoras de Cultivo Célula CHO Fermentación (A lo largo de un tren de siembra, el volumen del cultivo se expande de miliL a miles de Litros con células segregando el producto en el medio) Manufactura de Productos Biotecnológicos

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Manufactura de Productos Biotecnológicos Banco Celular de Trabajo Frasco s Iniciales Biorreactor de 20L Biorreactor de 80L Biorreactor de 400L Biorreactor de 2.000L Biorreactor de 10.000L

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Ultrafiltrado Llenado Filtrado profundo Columna 2 Columna 1 Manufactura final de Producto Sobrenadante Libre de Células Columna 3 Proceso de “Down-Stream” (Purificación) (Incluye remoción celular, remoción de HCP and HCDNA, virus, componentes del medio, remoción de substancias relacionadas (oxidadas-, aggregados-, deamidadas- y otras formas truncas), pasos de concentración, intercambios con el buffer) Manufactura de Productos Biotecnológicos

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Métricas de Complejidad Pequeña Molécula Proteina Número de registros de lotes < 10 > 250 Test de calidad del producto < 100 > 2,000 Pasos críticos de proceso < 100 > 5,000 Entrada de datos de Proceso < 4,000 > 60,000 R. Garnick, Genentech Caracterización del Control de Calidad de los Productos Biológicos/Biotecnológicos El Proceso es el Producto (y su documentación es extensa)

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13 El Modo de Acción de los Ac Monoclonales es complejo y puede involucrar contribuciones desde multiples Mecanismos Inhibición de Traducción de Señal o Activación de Receptor Inhibición de fijación a ligandos (Ejemplo : Cetuximab) Induccción de Internalización de Receptor (Ejemplo : IGF-1R-Abs ) Inhibición de Dimerización de Receptor (Ejemplo : Pertuzumab) Inhibición of Receptor Shedding (Ejemplo : Trastuzumab) Inducción de Apoptosis (Ejemplo : Rituximab) Activación de Mecanismos Efectores Activación del Complemento (CDC ) (Ejemplo : Rituximab) Bloqueo de Fijación a Ligandos (Ejemplo : Bevacizumab) Targeting de toxinas (Ejemplo : T-DM1) EGFR VEGF-R CD20 CD20 CD20 HER2 Activación de Células-T (Ejemplo: Catumaxomab) CD3 HER2 HER2 T-Cell Antibody-dependent cellular Cytotoxicity (ADCC) (Ejemplo: Rituximab) NK-Cell C1q TumorCell Modificada de: Hasmann, M. et al. (2009) ChiuZ, La contribución neta in-vivo de los diferentes modos de acción descritos para un mAb es comprendida en forma incompleta y puede ser también diferente en indicaciones diferentes.

¿mab, cept, ximab o Mao Tsé Tung?: 

¿mab, cept, ximab o Mao Tsé Tung?

Rituximab: 

Rituximab Anticuerpo anti-CD20 humano, Aprobado para el tratamiento del linfoma de células B en los adultos. Está siendo utilizado de forma experimental en varios otros relacionados con enfermedades autoinmunes como púrpura trombocitopénica inmune, el lupus eritematoso sistémico, la miastenia grave y la artritis reumatoide.

Especificidad de especies: 

Especificidad de especies Los anticuerpos son específicos para cada especie,. La aplicación de antibueros murinos en humanos puede llevar a perdida de efecto por generación de anticuerpos anti porción específica murina del anticuerpo monoclonal, y a reacciones de incopatibilidad “quimeric” anticuerpo: se mantiene constante la regtión humana y se varía la porción de antígeno, de origen animal “Humanizado” anticuerpo: el antígeno unido a la región primaria de la especie a administrar. Origen humano (95%) “human” anticuerpos: 100% secuencia humana

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CD20 es una proteína transmembrana hidrofóbico con un peso molecular de aproximadamente 35 kD se encuentra en linfocitos pre-B y B maduros El antígeno se expresa en la mayoría de los linfomas de células B no Hodgkin, pero no se encuentra en las células madre, las células pro-B, las células plasmáticas normales u otros tejidos normales CD20 regula un primer paso en el proceso de activación para el inicio del ciclo celular y la diferenciación, y posiblemente funciona como un canal de iones de calcio. CD20 no se desprende de la superficie celular y no se internaliza tras la unión de los anticuerpos. Antígeno libre CD20 no se encuentra en la circulación, por lo que una droga que reacciona con el CD20, tal como un anticuerpo, no se neutralizan antes de unirse a sus células diana.

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CD20 se expresa durante las etapas medias de la ontogenia y prácticamente desaparece en la etapa de células plasmáticas.

Mecanismo de acción: 

Mecanismo de acción Citotoxicidad mediada por complemento Citotoxicidad dependiente de anticuerpos mediada por células. Inducción de apoptosis

Mecanismos de resistencia: 

Mecanismos de resistencia Dependiendo de histotipo tumor, sólo algunos tumores, en una etapa de maduración definido, expresan el receptor específico / antígeno (por ejemplo, el CD20 se expresa sólo un subconjunto de los linfomas de células B). No todas las células de un tumor considerado positivo en efecto, expresan el antígeno (por ejemplo, el 30% de las células tumorales no expresan el receptor). En tal caso, el tratamiento puede seleccionar para un receptor / antígeno negativo variante del tumor en sí. Las células tumorales son muy inteligentes para sobrevivir, y, aunque positiva, en primer lugar, pueden cambiar su receptor / antígeno de estado (a través de regulación a la baja o caída de los receptores / antígeno) cuando fue atacado. Antígenos tumorales, por lo general vinculados a la superficie celular, se puede arrojar espontáneamente en la circulación. Si esto ocurre, entonces el MAB se une al antígeno soluble en la sangre, por lo que no llega al tumor. Los tumores sólidos pueden ser muy densa y la red circulatoria bastante estrecho. Anticuerpos monoclonales son moléculas relativamente grandes y pueden tener dificultades para entrar profundamente en las masas tumorales sólidas con baja densidad de los vasos.

Efectos Secundarios: 

Efectos Secundarios Se correlacionan con el número de circulación de células CD20 La fiebre es el efecto secundario más común (43%), seguido por el broncoespasmo (8%) e hipotensión (10%). Otros eventos adversos, incluyendo escalofríos, dolor de cabeza, náuseas, vómitos, hipotensión y la rinitis leve, Otras reacciones adversas incluyeron neutropenia, trombocitopenia y astenia Los pacientes con enfermedades preexistentes cardíacas, incluyendo arritmias y angina de pecho, han tenido recurrencias de estos eventos cardíacos durante las infusiones de rituximab. En raras ocasiones eventos cardiopulmonares graves y mortales, como la hipoxia, pulmonares, síndrome de distrés respiratorio agudo, infarto de miocardio y shock cardiogénico, se han producido. La mayoría de las reacciones mortales relacionadas con la perfusión ocurrieron con la primera infusión. Cuando se usa rituximab para el tratamiento de muchas enfermedades autoinmunes, probablemente debido a la reducción del número de células B, el perfil de efectos secundarios es muy reducido, con el principal problema de la tos y el leve descenso de la presión arterial. los niveles de citoquinas, especialmente TNF, aumenta inmediatamente después de la primera dosis de rituximab y que esto puede estar asociado con una respuesta febril

Trastuzumab: 

Trastuzumab es un anticuerpo monoclonal humanizado que interfiere con el HER2/neu receptor

HER2/neu receptor: 

HER2/neu receptor Los receptores HER son proteínas que se incrustan en la membrana celular y comunican las señales moleculares desde fuera de la célula al interior de la célula. Regulan el crecimiento celular, la supervivencia, adhesión, migración y diferenciación de funciones, que se amplifican o se debilita en las células cancerosas. En algunos tipos de cáncer, en especial algunos tipos de cáncer de mama HER2 está sobre-expresado, y, entre otros efectos, provoca que las células del seno que reproducen de manera descontrolada

Sobreexpresión HER2: 

Sobreexpresión HER2 El gen HER2 (también conocido como HER2/neu y el gen ErbB2) se amplifica en el 20-30% de las primeras etapas el cancer de mama. En las células de cáncer, la proteína HER2 se puede expresar de hasta 100 veces más que en las células normales (2 millones frente a 20.000 por célula Esta sobreexpresión conduce a la señalización proliferativa fuerte y constante y por lo tanto, la formación del tumor. La sobreexpresión de HER2 también causa la desactivación de los puestos de control, lo que permite aumentos aún mayores en la proliferación.

Mecanismo de acción: 

Mecanismo de acción Trastuzumab se une al dominio del IV segmento extracelular del receptor HER2/neu. Las células detienen su proliferación en fase G1 del ciclo. Aparentemente regula negativamente la expresión de Her2/neu e impide su dimerización

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Bloquea las vías de señalización posteriores. Inhibe la angiogénesis por inducción de factores antiangiogénicos y represión de factores proangiogénicos Herceptin identifica las células tumorales para su destrucción por el sistema inmunológico del cuerpo, conocido como citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC)

Valoración de sobreexpresión de Her/2: 

Valoración de sobreexpresión de Her/2 La sobreexpresión de Her/2 se hace por inmunohistoquímica. Ensayo semi cuantitativo estratifican los niveles de expresión en 0 , menos de 20.000 receptores 1+, + de 100000 receptores por célula, 2 +, 500.000 receptores por célula (dudoso para aplicación de Tratuzumab) 3+, 2.000.000 recep por celula (indicación de tratuzumab)

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Trastuzumab con quimioterapia ha demostrado incrementar la supervivencia y la tasa de respuesta en pacientes con cáncer de mama metastático Her2 positivo Un 70% de pacientes Her2 + no responden al tratamiento. La resistencia se desarrolla rápidamente, aparentemente por downregulation de intermediario intracelulares de la señal del Her2 al núcleo

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El método usual de la administración es dar una dosis de carga de 4 mg / kg por vía intravenosa mediante infusión de 90 minutos seguida de una dosis de mantenimiento de la 2 mg / kg semanales de una infusión de 30 minutos. Vida media de unos 6 días. La disposición de los anticuerpos no se ve afectada por edad o la función renal. La coadministración con taxanos aumenta la concentración de los anticuerpos (aproximadamente un 50% más); otros agentes quimioterapéuticos de uso común en el cáncer de mama no alteran el aclaramiento de trastuzumab ..

Efectos adversos: 

Efectos adversos Fiebre, escalofrios, nauseas, exantemas. Disfunción cardíaca en 2 a 7% de los casos, requiere monitoreo de función cardíaca y ecocardiograma Se evalúa riesgo beneficio cuando hay patología cardíaca preexistente. El riesgo se incrementa cuando se administra junto con antraciclina.

Bevacizumab: 

Bevacizumab Bevacizumab es un anticuerpo monoclonal recombinante humanizado Se une al factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Inhibe su interacción con los receptores VEGFR1, VEGFR2. VEGF es generalmente secretado localmente y actúa localmente que regula la proliferación y permeabilidad vascular e inhibe la apotosis de nuevos vasos. VEGF está aumentado en varios tipos de tumores, como de mama ovario, pulmon de celulas no pequeñas y colorrectal y su expresión se correlaciona con la neoascularización intratumoral.

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La vida media varía de acuerdo al peso, estatura, sexo y edad, pero la vida media es alrededor de 20 dias. La dosis usual es de 10 mg/kg cada dos semanas. No es conocido si debe ser ajustado en enfermedad renal o hepática.

Efectos adversos: 

Efectos adversos Puede afectar la cicatrización de heridas y ha llevado a la dehiscencia de heridas y / o perforaciones y abscesos en el 2-4% de los pacientes. Si es posible, el intervalo entre la cirugía y el inicio del tratamientodebe ser de 4 semanas. Hemorragia. Sangrado leve en la forma de epistaxis se presenta en algunos pacientes Riesgo de Hemorragia mayor gastrointestinal o pulmonar, que se ha producido en hasta un 20% de los pacientes. Activo sangrado en el tracto gastrointestinal y hemoptisis son contraindicaciones para el uso de bevacizumabuso. No debe utilizarse en pacientes con cáncer de pulmón con masas tumorales que implican la vía aérea central bronquial debido al riesgo de hemorragia bronquial fatal. Hipertensión severa también puede ser visto en 7-10% de los pacientes. El medicamento debe interrumpirse si la hipertensión no se pueden controlar fácilmente. Se asocia con proteinuria hasta en un 20% de los pacientes, pero menos del 1% desarrolla síndrome nefrótico. Puede empeorar la insuficiencia cardíaca congestiva, sobre todo en pacientes que han recibido antraciclinas o radioterapia relacionados con el corazón. Reacciones a la infusión son poco comunes y los anticuerpos anti bevacizumab no han sido documentados.

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Bevacizumab mejora el resultado en los pacientes con cáncer colorrectal y esta siendo probado en un gran número de otras neoplasias. Debido a la crítica y papel universal de la angiogénesis en la biología del cáncer, el bevacizumab se espera que sea un complemento útil para el tratamiento de muchos tipos de cáncer. Indications: metastatic colorectal carcinoma, non-small cell lung cancer Clinical trial use: breast cancer, ovarian cancer, glioblastoma, pancreatic carcinoma, renal cell carcinoma

Cetuximab: 

Cetuximab Cetuximab es un anticuerpo monoclonal quimérico de humano/ratón con una region constante de la IgG1 humana κ origen murino con regiones variables que reconocen el dominio extracelular del factor humano de crecimiento epidérmico (EGF). El anticuerpo está pensado para trabajar principalmente al bloquear el receptor de EGF y matando de hambre al tumor de un factor de crecimiento necesaria. Receptores de EGF se sobreexpresan en la mayoría de neoplasias epiteliales. Binding to EGF-R1 (on solid tumor cells): • Inhibition of endogenous ligands (EGF, TGFα), competitive inhibition of EGF-R1-tyrosine kinase, signal transduction ↓ • Receptor internalization and downregulation • Antibody-mediated cytotoxicity, apoptosis induction, tumor neoangiogenesis ↓ • Inhibition of tumor growth and metastasis

Factor de Crecimiento Epidérmico (EGFR) y KRAS: 

Factor de Crecimiento Epidérmico (EGFR) y KRAS Cetuximab

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Cetuximab fue aprobado para el uso pacientes con cáncer colorectal metastático. Los pacientes requieren tener ensayos inmunohistoquimicos de evidencia de la expresión del factor de crecimiento tisular Median response Indications: metastasized colorrectal carcinoma, head and neck cancer Clinical trial use: breast cancer, non-small cell lung cancer

Efectos adversos: 

Efectos adversos Luego de la primer exposición, produce sindromes ocmo los anticuerpos monoclonales, como bronoespasmo, e hipotensión Reacciones severas son encontradas en el 3% de los pacientes tratados. Disminución de la velocidad de administración y el uso de antihistamínicos controló la reacción Pacientes con preexistente enfermedad pulmonar deben tener mayor precaución al usarlo porque puede empeorar el cuadro. Causa rash acneiforme en el 90 % de los pacientes pero solo en grado severo en un 10 %, las lesiones pueden progresar a abcesos, requiriendo incisión y drenaje, la sepsis puede ser una complicación. Otras mucosas pueden ser afectadas como la nasal, oral, esofagica y gastrointestinal. Se evidencia malestar (48%), nauseas (29%), fiebre (27%), constipacion o diarrea (25% each),dolor abdominal (26%), y dolor de cabeza (26%). Los pacientes debens ser seguidos para el desarrollo de hypomagnesemia a través del curso de tratamiento (50%)

Referencias: 

Referencias Harrisons, manual of oncology 2008 Consice manual of Hematology and Oncology. 2008

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http://www.youtube.com/watch?v=yluYAt8miws&feature=related http://www.youtube.com/watch?v=wdTejNk8ato Rituximab ingles http://www.youtube.com/watch?v=AfCZl5WsDjA&feature=results_main&playnext=1&list=PLB6E8EF8488926072 . Bevacizumab http://www.youtube.com/watch?v=g64s4aWAE38 trastuzumab http://www.youtube.com/watch?v=33zPCz1yVxY cetuximab